ASSISTED REPRODUCTION TECHNOLOGY (ART)and Embryo Cell culture

عرض تقديمي عن الموضوع: "ASSISTED REPRODUCTION TECHNOLOGY (ART)and Embryo Cell culture"— نسخة العرض التّقديمي:

1 ASSISTED REPRODUCTION TECHNOLOGY (ART)and Embryo Cell culture

2 Lecture Contents 1- History of artificial insemination التلقيح الاصطناعي 2- Types of artificial insemination 3- Artificial insemination in farm and laboratory animals 4-Asseisted Reproduction Technologies تقنيات المساعدة على الانجاب -Embryo cell culture. (In vitro fertilization in humans and baby test tube) - Benefits Artificial insemination and In vitro fertilization

3 الحدث السنه إسم العالم 1- History of artificial insemination
إسم العالم أول من استخدموا فكرة Artificial Insemination 1664م نيثي كاوا قال ان العرب قاموا بتلقيح فرس فى حالة الشبق بقطعة قطن مستخرجة من مهبل فرس حديثة التلقيح في القرن الـ 14 أول من اكتشف النطف الذكرية 1676م انتون فان وليونهوك أول من استخدم التلقيح الاصطناعي وجربه على الكلاب، وحصل على 10 % 1780م سبلانزي نجحوا في تحضير المخففات للسائل المنوي واستعمالها القرن 18 م الأسبان إبتكر أول مهبل اصطناعي Artificial Vagina للكلاب 1914م العالم الإيطالى قلوسبي امانتيا Gluseppe Amantea

4 الحدث السنه إسم العالم استخدم المهبل الإصنطاعى للخيل وللأبقار ولقحو 120الف فرس 1,200,000بقرة 1922 1928 العلم الروسي ايفانوف ومساعدوه اكتشف جهاز التنبيه الكهربائي Electric electrode لجمع المني) 1936 العالم قين Gunn استخدام المهبل الإصنطاعى على بقية الحيوانات 1937 الباحث بونادونا استخدام المهبل الاصنطاعي 1938 العالم الروسى ميلوفانوف تخفيف السائل المنوي بمح البيض 1939م الباحثان لاري وفيلبس تجميد السائل المنوي للضفدع بواسطة سائل النيتروجين Liquid Nitrogen 1946 العالمان ليت وهوداب وروستاند استطاعوا أن يجمدوا السائل المنوي للثور بعد إضافة الجليسرول إليه للتجميد وأصبح السائل يتداول تجاريا 1950م الباحث بلوج ومساعدوه تطوير الإلكترود الكهربائى م الباحثين بلاكشو ودزوك ومساعدوه

5 الحدث السنه إسم العالم أن تطور حاويات القصبات أو القشات البلاستيكية Strows 1964م استطاعت الشركة الفرنسية ميلاد أول مولودة لويزا براون بواسطة طفل الأنبوب 1978م العالمين باتريك ستبتو وروبرت ادوارد

6 2- Types of artificial inseminationانواع التلقيح الاصطناعي
أ- التلقيح الاصطناعي الداخلي Artificial insemination (AI) It is the collection of semen from the male and diluted it , then inject the semen in the uterus of the female by special injectors tube (IUT) . ب- التلقيح الاصطناعي الخارجي (في الطبق)IVF) In Vitro Fertilization ( Is the collection of semen from the male, and collect the oocytes from the female, and fertilize the oocytes in vitro (externally or in the petri dish).

7 Semen collection methodsطرق جمع السائل المنوي
Semen collection from male using one of the following methods:- 1- المهبل الاصطناعي Artificial Vagina 2- التدليك المباشر للقضيب Massage of penis 3- جهاز التنبيه الكهربائي Electro-Ejaculator 4- الملعقة المهبلية Vaginal spongy 5- من البربخ Cauda Epididymis

8 - المهبل الاصطناعي 1- Artificial Vagina
It is a rubber tube connected with steel valve, lining with inner soft membrane, rubbery funnel cone shape, rubber bands, glass tube and is used in large animals, sheep, rabbits, and each has its own vagina due to the length of the penis. 2- التدليك المباشر للقضيب 2-Direct Massage of penis It is the most convenient and less side effects on animals. Direct massage was done for assistant gland by hand Used for humans and some domestic animal species like dogs and cats. Some wiled animals need training for collection semen like monkey and zoo animals.

9 - اشكال المهبل الاصطناعي 1- Artificial Vagina

10 Usually used for wiled animals like deer and some domestic animals.
3- جهاز التنبيه الكهربائي Electro-Ejaculator It is a metal probe, like a penis, connected with the electrodes gives a wave electric (or battery) ranges between 0-15 volts .It inserted in the rectum of the male to stimulate the ejaculatory and seminal glands of the male. It is used for males when they can not collect semen from them by artificial vagina . It is quick and easy way, but they are painful to the male and the amount of semen that is collected from the male is less than the artificial vagina way. Usually used for wiled animals like deer and some domestic animals.

11 أ-جهاز القذف الكهربائي متنقل يعمل بالبطارية الجافة
ب- جهاز القذف الكهربائي يعمل بالتيار الكهربائي

12 3- It can be used for horse , cow and camles.
- الملعقة المهبلية Vaginal spoon 1- Is a long spoon to collect semen from the female's vagina after intercourse directly, and may be connected to suction tube to suck the sperm from the vagina 2- They used to mate a male with a female outside the heat or estrous cycle. 3- It can be used for horse , cow and camles. 4- The amount of semen, which collect is less, and semen may be contaminated with fluids of the vagina.

13 1- Used for laboratory animals such as rat and mice
- من ذيل البربخ او الأنيبيبات المنوية 5- From Cauda Epididymis 1- Used for laboratory animals such as rat and mice 2- In a man who has no sperm in the semen, sperms collected by a surgical process, cutting off part of the seminiferous tubules and spreading it under a microscope to extract the sperm and then injected into the oocytes by intra-cytoplasmic sperm injection (ICSI) technique.

14

15 Semen evaluationتقييم السائل المنوي
1- Evaluation of the maleتقييم الذكر In terms of age, weight, size and especially the testes, and free from diseases. 2- Evaluation of the semen 1 - qualitative assessment * The volume of ejaculate: ranged between 2-15 ml according to the species of the male. * The appearance of semen and color: creamy white or yellowish.

16 2- Microscopic evaluation * Movement of the sperm * Forms of the sperm
* Sperm concentrations 3- Testes on the semen 1- قياس صدمة البرودة Cold shock Suddenly cooled to 4-5 OC and measuring the living and the dead before and after the test. 2- المقاومة للحرارة العالية High heat resistance Sperm storage at a temperature of Co for some time, and calculate the movement and the living and the dead.

17 3- قياس الرقم أو الأس الهيدروجيني Measure the number or the pH
Fresh semen is often neutral, then rises slightly and becomes acidic due to the increase the carbon dioxide CO2 and lactic acid accumulation in the semen. 4- صبغة الحي والميت Dye the living and dead sperm Where is a sample of sperm was dye by methylene blue, toluidine, or Eocene heimatoxyline; the dead sperm take the dye color (for membrane permeability), while the live sperm remains a white color green or transparent. الشكل يوضح بعضاً من حالات فحص الحيوانات المنوية باستخدام الصبغة الفلورسنتية. الحيوان المنوي المصبوغ باللون الأخضر حيوان منوي حي، والحيوان المنوي المصبوغ باللون الأحمر ميت

18 2- After slaughter of animals organism
* Methods of collecting eggs from female 1- From life organism (From the surface of the ovary at ovulation) …….. Ovum Pick Up 2- After slaughter of animals organism There are three ways to collect eggs from the ovary after the slaughter of the organism as follows: - 1- Aspiration of the ovary 2- Puncture of the ovary 3- Slicing of the ovary 3- From the oviduct

19 1- From life organism (From the surface of the ovary at ovulation) ……
1- From life organism (From the surface of the ovary at ovulation) …….. Ovum Pick Up in human and large animals.

20 Ova collection form ovary After slaughter of sheep or cow

21 Eggs entered the oviduct of the female mice hormonally activated
From the oviduct Eggs entered the oviduct of the female mice hormonally activated b) The oocytes exited from the oviduct and surounded with the cumulus cells.

22 Collection requirements and evaluation of oocytes
1- Structure of the female reproductive system 2- Knowledge of the reproductive cycle of the female and hormonal control way 3- How to maturate the oocytes and fertilized in vitro 4- How to evaluate and judge the oocytes quality (polar body, irregular cytoplasm, the number of layers of cumulus cells around the ova)

23 1- التلقيح الاصطناعي الداخلي ( AI)
3- Artificial Insemination of large and laboratory animal 1- التلقيح الاصطناعي الداخلي ( AI) It is the deposit of the sperms in the uterus of the female to fertilize the oocyte inside of the female reproductive system ,usually oviduct. Artificial insemination procedure was done by using of sperm with special specifications, pure and free from disease, have been collected from male integrity and have same specifications and superior genetic, semen has been keeping and frozen in liquid nitrogen in straws with a capacity ranging between sperm in a quarter to one ml.

24 In the laboratory animals such as mice, rat, and rabbit, semen collected from the epididymis in mice and rat while in rabbit collected by artificial vagina, then injected through the vagina using special tube to reach to the uterine horn and push the semen.

25 2- الطريقة العلمية للإخصاب الخارجي (في الطبق) in mice IVF
Summarized method of in vitro fertilization IVF in the outer dish after collecting the sperm as the appropriate way to the male, as well as collect the oocytes from the females by the above-mentioned methods. Then making the IVF. 1- تحقن إناث الفئران بالهرمون المحفز لنمو الحويصلات (FSH) بما يترواح بين 5-10 وحدة دولية (IU). 2- بعد 48 ساعة يتم حقن الإناث بهرمون التبويض (LH) 5-10 وحدة دولية 3- بعد ساعة يتم تشريح الإناث واستخراج البويضات من قناة البيض (شكل 88-أ). 4- يتم جمع الحيوانات المنوية من الذكر من منطقة ذيل البربخ ثم توضع الحيوانات المنوية في بيئة زيادة القدرة الاخصابية (Capacitation media). ثم يتم عمل الاخصاب الخارحي بوضع الحيوانات المنوية (10×6 10 ul=) على قطرة البويضات 4- يتم التخلص من الخلايا الحويصلية حول البويضات بوضعها في بيئة تحتوي على 300 وحدة دولية تقريبا من أنزيم الهيالورونديز(Hyaluronidase) لمدة 3-5د

26 8- توضع الأطباق في الحضان المزود بالهواء 95% وثاني أكسيد الكربون 5%.
5- ثم تغسل بوساطة البيئة ثلاث مرات 6- يتم عمل الإخصاب الاصطناعي الخارجي بوضع كمية معينة من سائل الحيوانات المنوية على البويضات تحت قطرة من البيئة في طبق بتري(شكل 88-ب). 7- تغطى قطرات البيئة بوساطة زيت البرافين ( Paraffin-Meneral oil ) لمنع التبخر والمحافظة على قطرات البيئة . 8- توضع الأطباق في الحضان المزود بالهواء 95% وثاني أكسيد الكربون 5%. 9- يتم متابعة النمو للأجنة (شكل 88-ج)وتغير البيئة كل يوم للتغذية والتخلص من الفضلات.

27 خطوات الإخصاب الخارجى فى الفئران
البويضات بعد استخراجها من قناة البيض وإزالة الخلايا الحويصلية عنها البويضة وقد تمت إضافة الحيوانات المنوية إليها الإخصاب الخارجي (في الطبق)

28 نمو بويضات للفأر المخصبة خارجيا
وتكوين الأجنة في مراحل التفلج

29 Assisted reproduction Technologies
It also known as the in vitro Fertilization in human-or Baby tube-test. It include the treatment of the male and female and the major step are : 1- Sperm collection: By direct massage of penis or by electro ejaculator and sperm evaluation (for AI or IVF or ICSI) 2- Ova collection By Laparoscope and aspiration of the follicles from the service of the ovary. 3- In vitro fertilization (IVF) or intra cytoplasmic sperm injection (ICSI). 4- Embryo culture in special culture medium to blastocyst 5- Embryo transfer to the mother

30 Assisted reproduction Technologies Summary of the Steps for Human In vitro fertilization IVF
intra cytoplasmic sperm injection (ICSI).

31 Intrauterine insemination tube for sperm injection
Used as Assisted reproduction Technologies حاقنة خاصة تدفع عبر المهبل، تتجاوز منطقة عنق الرحم لقذف الحيوانات المنوية داخل الرحم أو لنقل الأجنة كما في طفل الأنبوب للمرأة للمساعدة على الانجاب

32 Assisted reproduction Technologies
Ova collection By Laparoscope and aspiration of the follicles from the service of the ovary بوساطة المنظار أو اللابروسكوب؛ حيث يتم عمل فتحة صغيرة في البطن أو من خلال إبرة، تخترق جدار المهبل إلى تجويف البطن ثم الى المبيض ليتم شفط الحويصلات من سطحه.

33 5- The benefits of artificial inseminationفوائد التلقيح الاصطناعي
1- The right choice for the desired specifications through the use of semen from the male with the appropriate specifications desired. 2- Reduce costs by reducing the amount of males in the farm. 3- The possibility of fertilization in the best time for the females. 4- Control of diseases transmitted through sexual intercourse. 5- Solving the problems of infertility.

34 شكراً لحسن إستماعكم