استخلاص البرولين وتقديره في بناتات معرضه للاجهاد الملحي * البرولين من الاحماض الامينيه البسيطه التي تحتوي على حلقه عطريه او متغايره Heterocyclic في بقية الجزيء ويذوب البرولين في كحول ايثيلي 50-90% وليس الماء . * ويتراكم في الساق والاوراق للنباتات المتعرضه للاجهاد المائي او الملحي بحيث ترتفع نسبته جدا مقارنه بنباتات الكنترول.
الأهمية البيئية : حمض اميني يحمي الخلية تجاه الضرر او أي اجهاد بيئي. لما له من خصائص طبيعية فقد يغير من طبيعة جدر الخلايا فيجعلها محبة للماء متمسكة بة او يعمل على ضبط pH بالتالي يساعد هذا على مقاومة النبات لقساوة البيئة
الادوات ٭ نبات غض حمض السلفو سلسليك حمض الخليك الثلجي تلوين ننهايدرين ٭ نبات غض حمض السلفو سلسليك حمض الخليك الثلجي تلوين ننهايدرين انابيب بايركس حمام مائي/ ماصات حجم 1مل ثلج/ ورق ترشيح
طريقة العمل : قدر المحتوى البروليني تبعا لطريقة Bates et al,(1973) وتعتمد على وزن معين حوالي 0.5 جم من النبات الغض تطحن في 10 مل محلول مائي من sulphosalycilic acid. ثم يرشح المخلوط خلال ورق ترشيح (whatman) ,ويخذ 1مل من الرشح ويضاف عليه 2مل من glacial acetic acid جمض الخليك الثلجي . 2مل نينهايدرين ninhydren في أنبوبة بايركس Ninhydren Structure
وتوضع الانبوبة في حمام مائي عند درجة 100م لمدة ساعة, ثم يبرد المخلوط مباشرة في حمام ثلجي لوقف التفاعل . ثم يوضع 4 مل من toluene وترج الأنبوبة جيدا لمدة 20 ثانية وتترك في درجة حرارة الغرفة .
سوف تنفصل طبقة toluene وما تحمله من برولين فوق المخلوط سوف تنفصل طبقة toluene وما تحمله من برولين فوق المخلوط . ومن هذه الطبقة العليا يؤخذ 1 مل وتقرأ درجة امتصاصه باستخدام جهاز قياس الطيف الضوئي (uv\visible spectrophotometer-ultrospec 2100pro ) عند طول موجي 520 نانوميتير , ثم يقدر محتوى البرولين باستخدام المعادلة التالية: µ mole proline \g fr.wt= (Reading×4×5\wt.in g ) ×1.47 او يقدر محتوى البرولين بمقارنة بالمنحنى القياسي للالبيومين µ mole proline \g fr.wt
المنحنى القياسي للألبيومين :
المناقشة : المحتوى العالي من البرولين ربما يدل على اختلال في الايض النيتروجيني او قد يكون بمثابة وسيلة دفاعية للحد من تأثير الأحماض الأمينية الناتجة عن هدم البروتين.